離胺基氧化脢與環孢靈誘發牙齦增生關係之探討

環孢靈(cyclosporin A, 簡稱CsA)是臨床上被廣泛使用的免疫抑制劑，它的副作用很
多，其中與牙科相關的是：使用CsA 的病人中，大約百分之三十會有牙齦增生的問題，
並且容易因牙齦增生而出現牙周炎現象。根據過去的研究，我們知道環孢靈誘發牙齦增
生肇因於細胞外基質(extracellular matrix,簡稱ECM)分解系統的低落，使得結締組織的
ECM 產生增生的現象；離胺基氧化.也被證實和一些纖維化疾病有關。由文獻回顧可
知，鮮少有研究提及離胺基氧化.與CsA 誘發牙齦增生(cyclosporin A-induced gingival
overgrowth, 簡稱CsA-GO)的關係。本研究擬分3 年來探討lysyl oxidase 在正常牙齦與
CsA 誘發牙齦增生組織間的差異性。第一年：本研究擬收集人類正常牙齦與CsA 誘發
牙齦增生組織病理切片，以免疫組織化學染色法，瞭解lysyl oxidase 的表達情形。以組
織培養法，培養人類正常牙齦與CsA 誘發牙齦增生組織造纖維母細胞，抽取RNA、protein
及condition medium 比較lysyl oxidase 分泌量；人類正常牙齦造纖維母細胞另加入CsA
以RT-PCR、western blot、ELISA 等方法比較在是否會增加lysyl oxidase 分泌量，本研
究再多加入牙周致病菌、發炎激素(proinflammatory cytokines)，模擬在發炎的情形下CsA
是否會促進牙齦造纖維母細胞lysyl oxidase 形成。第二年：以組織培養法，培養人類正
常牙齦造纖維母細胞，利用1 %氧氣培養及加入已知會造成細胞缺氧的desferrioxamine
(DFO)製造缺氧的模式，再分別加入CsA，利用western blotting 及RT-PCR 的技術分析
CsA 對人類正常牙齦造纖維母細胞中lysyl oxidase 的表現為何? HIF-1a表達情形為何？
進一步利用訊息傳遞路徑的抑制劑探討CsA 對誘導人類正常牙齦造纖維母細胞中lysyl
oxidase 的相關訊息傳遞路徑及其蛋白變化，如MAPK family、PI3K/Akt pathway。以
EMSA 的分析方式探討CsA 是否影響lysyl oxidase 的相關轉錄因子表現或與其target
binding sequence 結合能力。第三年：另外則針對CsA 誘發牙齦增生及正常人之間，探
討其間lysyl oxidase 的差異性是否和lysyl oxidase DNA polymorphism有關？抽取CsA誘
發牙齦增生病人及正常人血液中genomic DNA，以PCR-RFLP 之方法來探討lysyl oxidase
polymorphism 的關聯性，並分析是否和性別、年齡、服用CsA 時間長短等因子具有相
關性。