開發新的真蕈類免疫調節功能蛋白及探討形成雙體的免疫活性

在真蕈類中分離出蛋白質對於人類周邊血細胞具有刺激增殖並誘發干擾素-r及腫瘤壞死因子-a分子。真蕈類免疫調節功能蛋白質在動物試驗中已證實可當作免疫抑制劑;減緩全身性休克反應及明顯的減小由發炎物 compound 48/80所誘發的水腫。相信上有許多此功能的蛋白尚未被發掘，所以本實驗已從台灣生產的菇類分離純化並將此基因選殖出新的此類真蕈類免疫調節功能蛋白質，並以GST融合蛋白表現系統將之表現，進行突變試驗。我們取周邊血以ELISA方式檢測是否藉由刺激輔助型T1細胞進而誘發IFN-r分泌。探討刺激IFN-r產生的機制及促進T 細胞增生的作用機理。而本研究第二目的是探討此真蕈類免疫調節功能蛋白質是否形成雙體且由蛋白何處序列扮演形成雙體角色。因此自然狀態下且不含變性劑時，以通過分子篩凝膠方式評估其分子量。因此構築一系列缺失突變或原始純化得免疫調節蛋白並以蛋白連接劑(Glutaraldehyde)連接後，以SDS電泳凝膠分析是否形成dimer或polymer。形成dimers的蛋白是否具有更佳的免疫調節功能，所以與原始蛋白的免疫調節活性比較，是以人類周邊血為材料評估，以酵素免疫連接法測定他們誘發干擾素-r和腫瘤壞死因子-a的能力。因此本研究計畫主要目的即開發新的真蕈類免疫調節功能蛋白質及探討此類蛋白如何形成雙體，並探討形成雙體後的免疫調節活性。