探討Cisplatin對肺癌細胞終端酶結合蛋白-2之調控

染色體終端序列(telomere)位於染色體兩端，由簡單重複核苷酸序列(TTAGGG)所組成，telomere repeat binding factor 2 (TRF2)，主要穩定染色體的完整性，避免與其他染色體發生融合或重組現象而引起染色體結構改變。當失去TRF2保護時，會引發細胞凋亡反應，而過量表現TRF2蛋白，會延緩細胞進入衰老階段。最近文獻指出血癌細胞株受到抗癌藥物etoposide 或放射線刺激下會短暫誘發TRF2 的表現，更穩定保護染色體的完整性，其表現可視為癌細胞受到DNA-damage反應下所產生的抗細胞凋亡機制 (Nakagami Y et al ., 2002 and Klapper W et al., 2003)。此外，在79位台灣非小細胞肺癌病人組織中發現TRF2高達83.3﹪表現量(Hsu C.P. et al., 2003)，因此可知TRF2在腫瘤組織是高度表現。雖然癌細胞受到抗癌藥物作用下會誘發TRF2的表現，但其作用機制不明，本計畫主要探討抗癌藥物如何調控TRF2表現，且研究抗癌藥物是經何種途徑誘導TRF2產生。或是抗癌藥物間接透過轉錄因子活化，進而結合到TRF2 promoter區位，所以本實驗擬先以定量PCR方式分析抗癌藥物-cisplatin和etoposide處理肺癌細胞是否會誘導 TRF2 增加。接著，將構築得自肺癌細胞的TRF2基因的上游約 700 鹼基對序列啟動子接合於螢光報告基因，其缺失突變變異株的質體，將其轉染至肺癌細胞中，藉由分析抗癌藥物處理過不同突變變異質體轉染過的細胞中luciferase活性，來了解抗癌藥物與TRF2 promoter調控關係，並知道其promoter區位的序列何者重要。並擬進一步分析抗癌藥物是否經由透過這些轉錄因子而影響TRF基因的表現，所以擬添加這些因子或使用此轉錄蛋白專一性的抑制劑至已轉染 TRF2 啟動子的肺癌細胞株，分析其轉錄活化能力。以瞭解cisplatin對TRF-2的調控機轉及其細胞毒性之關係。