中式調理肉類食品過程所產生之煙霧懸浮微粒中致突變物之研究(IX)人類乳突病毒和油煙暴露協力去活化台灣女性肺癌p53蛋白之研究

最近本研究室發現不抽煙女性肺癌患者有67% (30/45)的人類乳突病毒16/18型 (human papillomarvirus 16/18, HPV16/18) 之感染率，遠較抽菸和不抽菸之男性肺癌患者高 (24/96, 25%; Cancer Res. 61: 2799-2803, 2001)。尤其在過去有關白種人之肺癌幾乎沒有偵測到人類乳突病毒之感染。上年度計畫的初步結果顯示不抽煙之女性肺癌患者之p53基因大多不發生突變，且p53蛋白也大多不表現，這結果顯示HPV感染可能誘發ubiquitin proteasomal degradation pathway將p53蛋白去活化而引起肺癌形成。過去本計畫之成果亦發現烹調油煙中的致癌物 (Chem. Res. Toxicol. 13: 1046-1050, 2000)，可能造成女性肺癌患者之DNA鑑結物之含量較不抽菸男性肺癌患者高 (Environ. Mol. Mutagen. 37: 304-310, 2001)。因此本年度計畫擬探討HPV感染和DNA傷害是否會誘發ubiquitin proteasomal degradation pathway被大量表現，而造成p53蛋白的去活化。本計畫將以免疫組織化學分析法分析肺腫瘤組織切片中p53和ubiquitin蛋白之表現是否相關？另外以in situ RT-PCR方法分析肺腫瘤組織切片中是否有HPV 16/18 E6 mRNA的表現？並進行其間的相關性分析，以了解HPV E6 mRNA表現的肺腫瘤中，ubiquitin同時表現之肺癌患者之p53蛋白是否無法偵測到？這結果將有助於了解HPV 感染是否確實會誘發ubiquitin proteasomal pathway而去活化p53蛋白，造成肺腫瘤形成。為證明其間的相關性，本計畫將以基因轉殖技術，將HPV 16/18 E6 cDNA送入肺癌細胞株，同時給予不同劑量之烹調油煙主要致癌物－benzo[a]pyrene 7,8-diol-9,10-epoxide(BPDE) 處理，以螢光免疫分析法確定ubiquitin, p53和E6蛋白在細胞內之分布和其間的相關性，另外以Western blot分析三種蛋白間的相關性，是否如肺腫瘤組織所看到的。因此本計畫不僅能證明HPV感染是否是經由p53蛋白之去活化，而引起女性肺癌之形成，同時還能了解油煙致癌物和HPV感染在p53去活化上是否具有協力活化ubiquitin proteasomal pathway 的能力？總之，本計畫將有助於了解不抽煙台灣女性肺癌之形成，是否是經由多重環境因子之協力作用所致。