比較雙股RNA及LPS對人類巨噬細胞活化及基因表現影響

自體免疫疾病如第一型糖尿病、類風濕性關節炎是由於免疫細胞引起組織細胞殺傷而造成
的，病毒感染可能是引發這種自體免疫疾病的原因之一，病毒感染會造成感染細胞的病變
及區域性免疫細胞如巨噬細胞的活化，製造及分泌之cytokine 如IL-1β、TNF-α及IFN-γ
可能參與細胞殺傷的過程。
本研究的目的在比較雙股RNA（模擬病毒感染）和LPS（模擬細菌感染）對巨噬細胞活
化及基因表現之影響，本計劃將研究（1）細胞表現型（phenotypes）的轉變，包括NO、
H2O2 製造、吞噬能力、及製造釋放IL-1β、TNF-α的能力（2）基因型的表現，包括IL-1β、
TNF-α、iNOS、COX-2 及趨化因子，（3）訊號傳遞路徑的研究，利用化學抑制劑作路徑
阻斷，分析訊號傳遞路徑基因型的改變的影響。（4）尋找PKR 所調控的基因及功能，及
研究阻斷此路徑對細胞活性及功能的影響。
方法5x105 human leukemia HL60 細胞，培養在RPMI （含10%FCS）培養液，加入1μM 1,25
(OH)2 Vitamin D3 經3-5 天分化刺激後，以NBT assay 或細胞表面分子CD11b、CD14 鑑定
分化之細胞，再加10μg/ml LPS，雙股RNA（以polyI:C 50 μg/ml 替代），利用Griess 試
劑，測量培養液中NO3
- 的量。以Western Blot 或ELISA 技術測量細胞內及分泌性蛋白質
量的高低。利用RT-PCR 技術分析基因表現。利用某傳導路徑的化學抑制劑，例如﹕
PD098059 （ 100 μM；MAPK/ERK 抑制劑）， SB203580 （ 10 μM； p38 抑制劑），
NG-methyl-L-arginine （L-MA，1.0 mM；iNOS 抑制劑），PDTC、MG132（NFκB 抑制劑），
及利用PKR siRNA（small interference RNA）研究個別訊號傳導路徑所扮演的角色。
本研究之成果將有助於瞭解巨噬細胞在不同感染功能及基因表現的不同，對於研究自體免
疫疾病或是感染性疾病對感染部位的免疫防禦反應的影響，使得吾人能進一步藉由分子生
物學的研究來探討血管病變機轉，未來在臨床預前診斷、藥物研發、及疾病預防及治療上
具有相當重要的實質貢獻。