麩胱甘[月太]轉脢-M2減緩肺癌細胞DNA傷害與阻斷MDM2 mRNA短小缺失之探討

麩胱甘.轉移.(GST)在細胞特有的解毒機制中扮演重要的角色，它可
移除來自細胞外的毒性物質並減少毒性物質對細胞的傷害。本研究室初
步分析117 位非小細胞肺癌病患的肺部組織，發現其中26 位病患的肺組
織中表現同一種短小缺失型態的MDM2 基因(MDM2 mRNA alternative
splicing)，而先前的研究也指出這種短小缺失型態的MDM2 基因具有使腫
瘤惡質化的特性。統計分析的結果也發現抽煙患者與MDM2 基因的短小
缺失發生有高度的正相關性；此外以香菸中的致癌物質B[a]P 及其最終代
謝物- benzo(a)pyrene-diol-epoxide （BPDE）處理肺癌細胞(H1355)也發現
會造成MDM2 基因的短小缺失，然而處理正常的人類肺纖維母細胞
(MRC-5)卻無類似的現象。進一步分析兩株細胞內的麩胱甘.轉移.酵素
活性也發現， MRC-5 細胞株的麩胱甘.轉移.酵素活性明顯高於H1355
細胞株；而RT-PCR 分析結果也發現MRC-5 細胞中分別表現麩胱甘.轉
移.酵-Pi、M2 與M4 的mRNA，H1355 細胞僅表現麩胱甘.轉移.酵
-M4 的mRNA。前人的研究指出，麩胱甘.轉移.酵-Pi 在肺部活性的表
現與肺癌的發生有關；然而麩胱甘.轉移.酵-M2 在肺癌發生過程中所扮
演的角色至今仍不清楚。因此，本研究擬探討細胞中的麩胱甘.轉移.
-M2 在細胞受到致癌因子-BPDE 傷害過程中是否扮演重要的保護角色，
並進一步研究其是否可調控由致癌因子所誘發之MDM2 基因短小缺失。
首先，本研究擬以RT-PCR 增幅MRC-5 及H1355 細胞中的麩胱甘.轉移
.-M2 及M4 的基因表現，並以自動基因定序儀確定所增幅的麩胱甘.轉
移.序列無誤；進一步將麩胱甘.轉移.-M2 及M4 穩定表現於H1355
細胞株，選擇不同麩胱甘.轉移.表現量的細胞株。同時嘗試以RNA
interference 降低MRC-5 細胞GST-M2 表現，並利用競爭性ELISA 偵測
BPDE 鍵結物的含量及nested RT-PCR 評估其是否可有效的降低致癌物質
對細胞的傷害程度及短小缺失MDM2 基因的誘發表現。同時，本研究也
分析細胞週期及相關基因的變化以評估麩胱甘.轉移.-M2 在細胞受到
傷害時所扮演的角色；冀望由不同的角度切入觀察並闡釋麩胱甘.轉移
.-M2 在細胞受到香煙中致癌物質傷害過程中扮演重要的保護角色。