低氧誘導因子-1α與環孢靈誘發牙齦增生關係之探討

環孢靈(cyclosporin A, 簡稱CsA)是臨床上被廣泛使用的免疫抑制劑，它的副作用很
多，大約百分之三十使用CsA 的病人會有牙齦增生的問題，並且容易因牙齦增生而出現
牙周炎現象。根據過去的研究，我們知道環孢靈誘發牙齦增生肇因於細胞外基質
(extracellular matrix,簡稱ECM)分解系統的低落，使得結締組織的ECM 產生增生的現
象；第一型低氧誘導因子a (簡稱：HIF-1a)也被證實和一些纖維化疾病有關。由文獻回
顧可知，鮮少有研究提及HIF-1a 與CsA 誘發牙齦增生(cyclosporin A-induced gingival
overgrowth, 簡稱CsA-GO)的關係。本研究擬分3 年來探討HIF-1a在正常牙齦與CsA 誘
發牙齦增生組織間的差異性。第一年：本研究擬收集人類正常牙齦與CsA 誘發牙齦增生
組織病理切片，以免疫組織化學染色法，了解HIF-1a的表達情形。以組織培養法，培
養人類正常牙齦與CsA 誘發牙齦增生組織造纖維母細胞，抽取RNA、protein 及condition
medium 比較HIF-1a分泌量；人類正常牙齦造纖維母細胞另加入CsA 以RT-PCR、Western
blot、ELISA 等方法比較在是否會增加HIF-1a分泌量，本研究再多加入牙周致病菌、發
炎激素(proinflammatory cytokines)，模擬在發炎的情形下CsA 是否會促進牙齦造纖維母
細胞HIF-1a形成。第二年：針對CsA 誘發牙齦增生及正常人之間，探討其間HIF-1a的
差異性是否和HIF-1aDNA polymorphism 有關？抽取CsA 誘發牙齦增生病人及正常人
血液中genomic DNA，以PCR-RFLP 之方法來探討HIF-1apolymorphism 的關聯性，並
分析是否和性別、年齡、服用CsA 時間長短等因子具有相關性。第三年：以組織培養法，
培養人類正常牙齦造纖維母細胞，利用1 %氧氣培養及加入已知會造成細胞缺氧的
desferrioxamine (DFO)製造缺氧的模式，再分別加入CsA，利用Western blotting 及RT-PCR
的技術分析CsA對人類正常牙齦造纖維母細胞中HIF-1a的表現為何?進一步利用訊息傳
遞路徑的抑制劑探討CsA 對誘導人類正常牙齦造纖維母細胞中HIF-1a的相關訊息傳遞
路徑及其蛋白變化，如MAPK family、PI3K/Akt pathway。以EMSA 的分析方式探討CsA
是否影響HIF-1a的相關轉錄因子表現或與其target binding sequence 結合能力。