Project title
94學年度國家科學及技術委員會補助研究計畫
Acronym
專題研究計畫
Internal ID
NSC94-2311-B040-002
Principal Investigator
Status
research project
Start Date
August 1, 2005
End Date
July 31, 2006
Organizations
中山醫學院生物化學研究所
Partner Organizations
Project Web Site
Options
斑馬魚中FOXO5轉錄因子的選殖、表現模式與定性分析
Description
Forkhead 轉錄因子家族包含至少有90 個成員並且於許多的生物如：酵母菌、果蠅
及人類中皆有表現。Forkhead 轉錄因子可調控許多生物功能如：細胞週期進行、細胞凋
零及細胞分化。在哺乳類中，FOXO 次家族成員如FKHR、FKHR-L1 及AFX 被證實與
線蟲的Daf-16 有極高相似性並且於insulin 的訊號傳遞路徑扮演重要角色。除此以外，
FOXO 次家族成員可以被PKB 磷酸化而與14-3-3 蛋白結合進而被轉送出細胞核然後停
留在細胞.並且抑制了FOXO 的活性。目前研究亦顯示不同的FOXO 成員有不同的組
織分佈且在胚胎發育中扮演不同的角色。在此研究，我們首先以電腦比對方式尋找出斑
馬魚中FOXO 蛋白的DNA 序列並利用反轉錄.-聚合.連鎖反應及原位雜交方式(in situ
hybridization)來觀察FOXO 蛋白在不同的斑馬魚發育過程中的表現模式，接著我們將利
用GST-pull down 以及共同免疫沉澱方法來偵測此磷酸化的FOXO 蛋白是否可與人類
14-3-3 gamma 蛋白結合，最後我們將利用基因剔除方式來觀測FOXO 蛋白在斑馬魚胚胎
發育中所扮演的角色。
及人類中皆有表現。Forkhead 轉錄因子可調控許多生物功能如：細胞週期進行、細胞凋
零及細胞分化。在哺乳類中，FOXO 次家族成員如FKHR、FKHR-L1 及AFX 被證實與
線蟲的Daf-16 有極高相似性並且於insulin 的訊號傳遞路徑扮演重要角色。除此以外，
FOXO 次家族成員可以被PKB 磷酸化而與14-3-3 蛋白結合進而被轉送出細胞核然後停
留在細胞.並且抑制了FOXO 的活性。目前研究亦顯示不同的FOXO 成員有不同的組
織分佈且在胚胎發育中扮演不同的角色。在此研究，我們首先以電腦比對方式尋找出斑
馬魚中FOXO 蛋白的DNA 序列並利用反轉錄.-聚合.連鎖反應及原位雜交方式(in situ
hybridization)來觀察FOXO 蛋白在不同的斑馬魚發育過程中的表現模式，接著我們將利
用GST-pull down 以及共同免疫沉澱方法來偵測此磷酸化的FOXO 蛋白是否可與人類
14-3-3 gamma 蛋白結合，最後我們將利用基因剔除方式來觀測FOXO 蛋白在斑馬魚胚胎
發育中所扮演的角色。