探討靈芝免疫調節功能蛋白抑制終端酵素活性進而限制肺癌細胞生長機制

靈芝一直以來被視為傳統中藥的翹礎，在細胞和動物實驗證實靈芝具有保護肝臟、抗腫瘤等功能。腫瘤的治療一直是生物醫學領域相當被重視的焦點，尤其近年來許多學者著重於促進腫瘤細胞死亡來達到減緩腫瘤形成的目的。由Hanahan和Weinberg等人指出癌症形成的六大特徵其中擁有無限次複製能力是癌化過程中必備的條件(Hanahan and Weinberg, 2000)。因此在癌症的形成過程當中，可能需要終端酶的活性來幫助細胞不斷分裂，且腫瘤細胞較易渡過衰老死亡的危機期通常亦伴隨著終端酶活性再活化，所以終端酶在癌化過程中扮演著不可或缺的角色。抑制終端酶活性表現可使細胞在分裂過程中漸漸失去染色體終端DNA片段，而延緩腫瘤的生長，甚至在造成細胞損傷之前死亡。由我們先前研究發現非小細胞肺癌病人的檢體中偵測終端酶活性可作為診斷肺癌的重要指標，人類非小細胞肺癌染色體終端酶再活化可是為一個較差的預後指標，若喪失染色體終端酶活性的病人有較長的存活率(已發表於Lung Cancer 2003期刊) 。最近更有文獻指出在裸鼠模式中發現服用茶多酚類化合物epigallocatechin gallate(EGCG)後會明顯抑制腫瘤生長及染色體終端酶活性(Naasani et al,2003)，因此增加中草藥對於抗癌方面的科學證據綜合以上觀點本計畫著重於FIP-gts抑制終端酶活性作用機制進而抑制癌細胞的生長，達到抗癌的作用。我們初步實驗證實松杉靈芝蛋白(FIP-gts)會造成A549肺癌細胞皺縮並抑制細胞生長，是否有抗腫瘤的特性仍有待進一步分析首先我們將以染色體終端酶重覆增幅步驟 ( Telomeric Repeat Amplification Protocol，TRAP assay)分析有無處理FIP-gts後肺癌細胞細胞株A549終端酶活性表現，我們利用已知多酚類化合物epigallocatechin gallate(EGCG)做為終端酶活性抑制反應的對照組，以RT-PCR分析此mRNA的轉錄表現量，接著已自肺細胞中以PCR增幅htert promoter基因，且構築 htert 的promoter接於pGL-3的載體上的質體，轉殖肺癌細胞株。藉由有無處理FIP-gts，分析luceriferase活性來決定FIP-gts抑制htert基因的能力，並將其構築完成的htert-pGL3在經一系列的缺失短小突變決定其FIP-gts所影響的位置，並分析它是透過哪些轉錄因子直接或間接的關係結合到htert promoter，將以EMSA分析 轉錄因子 是否鍵結到此DNA序列決定。 所以，我們擬繼續深入探討FIP-gts參與抑制終端酶活性的方式，並探討在肺癌細胞株中抑制終端酶轉錄活性的分子機轉，進而促使細胞衰老死亡，最後抑制腫瘤發生。所以本計畫擬闡釋FIP-gts對於染色體終端酶調控的重要性。