Project title
95學年度國家科學及技術委員會補助研究計畫
Acronym
專題研究計畫
Internal ID
NSC95-2314-B040-032
Principal Investigator
Status
research project
Start Date
August 1, 2006
End Date
July 31, 2007
Organizations
中山醫學院毒理學研究所
Partner Organizations
Project Web Site
Options
探討乙型生長因子誘導巨噬細胞凋亡之機制
Keywords
酒精
巨噬細胞
乙型生長因子
細胞凋亡
Description
根據研究顯示慢性酒精中毒者和有酒癮者罹患傳染病的機會比一般非酗酒者還要高，原因在於這些酗
酒者的免疫功能已被抑制，故較不能抵抗外來的疾病。另有證據指出在一夕之間飲酒狂歡的人數並不
少於慢性酒精中毒者，然而有關免疫功能在這些急性酒精中毒者的情形所知仍有限，故本人曾利用動
物模式探討單一劑量的酒精對自然殺手細胞的影響。本人以前的研究顯示餵與單一劑量的酒精在老鼠
體內可以抑制自然殺手細胞(natural killer cells)的功能，酒精所誘導的糖皮質素(glucocorticoids)是抑制
自然殺手細胞功能的主因。本實驗室的研究也發現，急性酒精暴露後會造成小鼠血液和腹腔液的TGF-β
濃度上升，導致腹腔巨噬細胞的細胞數目及免疫功能下降。後來的研究證實細胞數目的減少是由於腹
腔巨噬細胞發生細胞凋亡所引起。因此我們懷疑，急性酒精暴露後致使老鼠腹腔巨噬細胞發生細胞凋
亡可能是誘發乙型生長因子(TGF-β)濃度上升所造成。本研究我們欲進一步探討TGF-β 誘導巨噬細胞
發生細胞凋亡之機制，以幫助我們釐清何種分子參與此路徑的進行，並可藉由抑制此分子的作用降低
細胞凋亡現象，促使巨噬細胞免疫功能回升。值得一提的是，目前尚未有文獻報告有關TGF-β 誘導巨
噬細胞發生凋亡之機制。巨噬細胞 (macrophages) 在疾病的防禦上扮演一相當重要的角色。本計劃將
探討乙型生長因子(TGF-β)誘導巨噬細胞凋亡之機制。本計劃擬以一年的時間完成以下的研究目標：
一、探討粒腺體依賴型路徑(mitochondria-dependent pathway)在TGF-β誘導巨噬細胞發生凋亡所
扮演的角色
二、探討死亡受體媒介路徑(death receptor mediated pathway)在TGF-β誘導巨噬細胞發生凋亡所
扮演的角色
三、探討MAPK 激.路徑(MAPK pathway)在TGF-β誘導巨噬細胞發生凋亡所扮演的角色
實驗前數據已知TGF-β 會誘導RAW264.7 巨噬細胞發生細胞凋亡，而細胞凋亡主要可分成粒線體依賴
型路徑與死亡受體媒介路徑，為了進一步瞭解此細胞凋亡反應與何種路徑有關，因此我們將分別對這
二種路徑進行探討。另外，我們欲觀察TGF-β誘導的細胞凋亡反應是否與活化MAPKs 有關。在細胞
凋亡的實驗上，我們將以4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)染色和流式細胞分析儀分析巨噬細胞發
生細胞凋亡的百分比。另外，我們將以西方墨點法(Western blotting)和酵素活性測試(ELISA)分析致凋
亡蛋白(proapoptotic proteins)caspases 在巨噬細胞發生細胞凋亡上所扮演的角色。再者，我們將以in vitro
kinase assay 偵測MAPK 的活性。本計劃對急性酒精中毒者和酒癮者的健康情形將有重要的幫助，因
為這些病患的疾病罹患率及致癌率均比一般人高，這或許和巨噬細胞功能受到抑制有關。酗酒已經是
一個世界性的問題，而且巨噬細胞又是對抗外來感染及癌症形成的第一道防線，本研究在人類健
康上將可帶來莫大的助益。而且這些研究結果，將為未來的研究提供一個重要的啟發。在藥理學的應
用上，可研發阻斷訊號傳遞分子的藥物進而減少對免疫功能的危害，進而達到預防及治療疾病的目的。
酒者的免疫功能已被抑制，故較不能抵抗外來的疾病。另有證據指出在一夕之間飲酒狂歡的人數並不
少於慢性酒精中毒者，然而有關免疫功能在這些急性酒精中毒者的情形所知仍有限，故本人曾利用動
物模式探討單一劑量的酒精對自然殺手細胞的影響。本人以前的研究顯示餵與單一劑量的酒精在老鼠
體內可以抑制自然殺手細胞(natural killer cells)的功能，酒精所誘導的糖皮質素(glucocorticoids)是抑制
自然殺手細胞功能的主因。本實驗室的研究也發現，急性酒精暴露後會造成小鼠血液和腹腔液的TGF-β
濃度上升，導致腹腔巨噬細胞的細胞數目及免疫功能下降。後來的研究證實細胞數目的減少是由於腹
腔巨噬細胞發生細胞凋亡所引起。因此我們懷疑，急性酒精暴露後致使老鼠腹腔巨噬細胞發生細胞凋
亡可能是誘發乙型生長因子(TGF-β)濃度上升所造成。本研究我們欲進一步探討TGF-β 誘導巨噬細胞
發生細胞凋亡之機制，以幫助我們釐清何種分子參與此路徑的進行，並可藉由抑制此分子的作用降低
細胞凋亡現象，促使巨噬細胞免疫功能回升。值得一提的是，目前尚未有文獻報告有關TGF-β 誘導巨
噬細胞發生凋亡之機制。巨噬細胞 (macrophages) 在疾病的防禦上扮演一相當重要的角色。本計劃將
探討乙型生長因子(TGF-β)誘導巨噬細胞凋亡之機制。本計劃擬以一年的時間完成以下的研究目標：
一、探討粒腺體依賴型路徑(mitochondria-dependent pathway)在TGF-β誘導巨噬細胞發生凋亡所
扮演的角色
二、探討死亡受體媒介路徑(death receptor mediated pathway)在TGF-β誘導巨噬細胞發生凋亡所
扮演的角色
三、探討MAPK 激.路徑(MAPK pathway)在TGF-β誘導巨噬細胞發生凋亡所扮演的角色
實驗前數據已知TGF-β 會誘導RAW264.7 巨噬細胞發生細胞凋亡，而細胞凋亡主要可分成粒線體依賴
型路徑與死亡受體媒介路徑，為了進一步瞭解此細胞凋亡反應與何種路徑有關，因此我們將分別對這
二種路徑進行探討。另外，我們欲觀察TGF-β誘導的細胞凋亡反應是否與活化MAPKs 有關。在細胞
凋亡的實驗上，我們將以4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)染色和流式細胞分析儀分析巨噬細胞發
生細胞凋亡的百分比。另外，我們將以西方墨點法(Western blotting)和酵素活性測試(ELISA)分析致凋
亡蛋白(proapoptotic proteins)caspases 在巨噬細胞發生細胞凋亡上所扮演的角色。再者，我們將以in vitro
kinase assay 偵測MAPK 的活性。本計劃對急性酒精中毒者和酒癮者的健康情形將有重要的幫助，因
為這些病患的疾病罹患率及致癌率均比一般人高，這或許和巨噬細胞功能受到抑制有關。酗酒已經是
一個世界性的問題，而且巨噬細胞又是對抗外來感染及癌症形成的第一道防線，本研究在人類健
康上將可帶來莫大的助益。而且這些研究結果，將為未來的研究提供一個重要的啟發。在藥理學的應
用上，可研發阻斷訊號傳遞分子的藥物進而減少對免疫功能的危害，進而達到預防及治療疾病的目的。