葉下珠與補骨脂抑制癌瘤細胞轉移與誘導癌細胞凋亡之研究

根據衛生署公佈之台灣十大死亡原因顯示癌症仍為十大死因之首，居高不下，如何治療
癌症病人，尋找更有效的抗癌藥物，是一個迫切的問題。目前有許多文獻指出，癌細胞與正
常細胞差別在於無法進行一般細胞凋亡、具有異常的增生能力與高度轉移能力。而癌細胞的
轉移往往是造成癌症病人病灶復發致死及最難根治的主要原因，其過程包括細胞骨架的改
變、細胞的貼附、細胞外基質的降解及細胞侵襲能力的改變。長期以來，中草藥被應用於傳
統醫學及民俗療法中的各種治療，已有多種中草藥被確認其具有抗氧化、抗發炎、抗過敏及
抗癌等活性，但是到目前為止，對於中草藥抑制癌細胞轉移、誘導癌細胞凋亡以及其中之詳
細機轉的都還不是很清楚。在本實驗中，我們利用葉下珠與補骨脂之酒精(50%)萃取物觀察
其抑制多種肺癌(A549, H1299, LLC)轉移及乳癌細胞(MDA-MB-231、HS578T 與JC) 生長之
功效。經本實驗室初步分析，發現補骨脂之萃取物能有效誘導人類乳癌細胞(MDA-MB-231)
走向死亡的現象。而葉下珠之萃取物則可明顯抑制人類肺癌細胞(A549)之細胞侵襲及MMP-2
蛋白分解酶的表現，此外葉下珠亦可有效抑制癌症促進因子PMA 及IL1-β所誘導之細胞癌化
能力，並顯著促進細胞骨架蛋白E-cadherin 的表達。綜合上述，在抑制癌瘤細胞侵襲轉移能
力研究與促進癌細胞走向凋亡方面應該會有所貢獻，所以本計畫擬分為三年進行，第一年擬
進行: (1)利用invasion assay、傷口癒合實驗、adhesion assay，Superarray 探討葉下珠抑制多
種不同癌細胞轉移、貼附之能力，並分析葉下珠對肺癌細胞其migration/invasion 相關基因之
蛋白層次與mRNA 層次的影響，(2)與其是否會影響多種細胞骨架蛋白的表達；(3)利用MTT
assay、flow cytometry、colony formation、mitochondrial membrane potential assay、DNA
fragmentation assay、TUNEL、Annexin V-conjugated Alexafluor 488，探討補骨脂抑制乳癌細
胞增生並誘導癌細胞凋亡之能力。計畫第二年擬進行: 利用Superarray、proteomic assay、
Western blot、Luciferase assay、大量表達之載體，深入探討葉下珠抑制(1)由PMA 與IL1-β所
誘導癌細胞轉移、(2)細胞骨架重整與(3)細胞增生、誘導癌細胞凋亡之能力其中的詳細機轉與
訊息傳遞路徑。計畫第三年擬進行: (1)購買文獻已知葉下珠與補骨脂之單離成分，做有效成
分之鑑定分析; (2)免疫缺陷的小鼠(BALB/c nu/nu mice)由尾靜脈接種肺癌細胞，與
LLC-bearing mice model 探討葉下珠抑制癌細胞轉移之能力；(3)以免疫缺陷的小鼠(BALB/c
nu/nu mice)皮下接種各種不同之人類乳癌細胞，與JC-bearing mice model，觀察補骨脂抑制
腫瘤生長的能力。