提昇私校研發能量專案計畫---自體免疫疾病中心之建立---子計畫五：內質網病變所引發之細胞凋亡在自體免疫疾病的角色(I)

免疫耐受性的調控出現問題是自體免疫疾病重要的致病機轉之㆒，細胞凋亡(apoptosis)則是維
持免疫耐受性的方式之㆒，細胞凋亡不完全使得殘留的self-reactive 免疫細胞可能對組織細胞
進行的殺傷（例如第㆒型糖尿病T1DM），而細胞凋亡過程㆗引起蛋白質修飾變化，堆積結合
形成具有抗原性的分子，若是不及時由吞噬細胞清除可能引起死亡細胞崩解並釋放出抗原分
子，免疫複合物會造成全身性堆積（例如紅斑性狼瘡SLE）。如果能清楚的了解在不同自體免
疫疾病㆗引起細胞凋亡的原因及調控，將有利我們更進㆒步了解致病機轉，以及藥物的研發。
細胞凋亡可經由不同的藥物刺激，可引發不同的死亡路徑，包括（1）細胞膜接受器-caspase 8
（2）細胞核-p53 及其㆘游Bax，（3）粒線體-caspase 9，以及最近幾年發現的（4）內質網
-caspase12。內質網是細胞合成及修飾分泌性蛋白例如 β細胞之胰島素、免疫細胞之細胞激
素、趨化因子或細胞膜蛋白例如接受器、MHC 分子，以及調控鈣離子的重要胞器。當這些功
能調控失常就會引發內質網病變反應（ER stress responses）包括（a）引發基因表現，（b）蛋
白質合成降低，（c）加速異常蛋白的分解，及（d）細胞凋亡（ER stress-mediated apoptosis）。
內質網病變引起的細胞凋亡主要靠caspase 12 及 CHOP 所調控。
本研究的兩大方向﹕
（A） 探討內質網病變所引起的基因表現﹕
• 利用基因晶片來大量篩選培養之HL60 細胞在內質網病變所造成基因的改變，並利用抑制
劑（p53, NFκB, MAP kinases）或專㆒性干擾RNA（small interference RNA，簡稱siRNA）
來分析基因表現訊號傳遞路徑。
• 比較內質網病變及其他刺激所引發的caspase 路徑及其調控的機制，及研究缺少特定基因
表現時（利用siRNA 抑制caspase 12 及CHOP 等）對細胞凋亡以及基因表現所造成的影
響。
• 利用Real time PCR 分析在SLE 及類風濕性關節炎（RA）病患和內質網病變有關的基因
表現（包括CHOP、GRP78、 PDI、 caspase 12 等）。
• 尋找和內質網病變有關的基因之多型性，並探討和疾病的相關性
（B） 探討內質網病變所引起的蛋白質表現及修飾
• 利用2D PAGE 蛋白質電泳研究培養細胞的蛋白質表現及修飾，鑑定及分析這些蛋白質
• 利用ELISA 研究病患血清和內質網病變有關的蛋白質表現量
• 利用ELISA、Western Blot 技術及病患血清研究這些修飾後的蛋白質是否具有抗原性。
這兩大方向均包含in vitro 細胞培養及臨床病患基因及生化分析，這些資料將存放在總計劃的
資料庫，供其他子計劃成員利用，並可作系統性的比較。本研究也包含病患檢體之收集（DNA、
血清、血漿），對總計劃的樣品庫的建立也有顯著的貢獻，這些樣品也可應用在其他子計劃的
研究。