下視丘旁室核微量注射蛋白激脢藥物對「安非他命引發之厭食作用」在自由活動動物的效應

安非他命(amphetamine, AMPH)是一種厭食劑。AMPH若以持續注射的處理方式，每天注射一次，持續數天時，在第一天可引發最顯著的厭食效應(本文稱為AMPH anorexia)，但在隨後數天，則逐漸產生厭食耐受性(本文稱為AMPH tolerance)。Y型神經勝.(neuropeptide Y, NPY)是腦內含量豐富可控制食慾的神經傳遞物，主要分佈於下視丘弓形核(arcuate nucleus)及旁室核(paraventricular nucleus, PVN)。最近，我們發現，無論是AMPH anorexia或AMPH tolerance，均與NPY基因的調控有關；AMPH anorexia與「抑制NPY基因的表現」有關，而AMPH tolerance則與「NPY基因表現的逐漸回升」有關。本研究將進一步探討AMPH持續注射時，NPY神經元內蛋白激.C訊息傳遞路徑(PKC signaling pathway)是否參與調控NPY基因的表現。實驗將以PKC mRNA的表現為觀察重點，並以自由活動的動物(in vivo)為材料。除此之外，也將決定特異性PKC異構.的種類。
實驗將分「AMPH anorexia」及「AMPH tolerance」兩組探討。在「AMPH anorexia」組方面，初步的實驗發現，至少有兩種下視丘PKC isozyme (PKCα, PKCδ)參與AMPH anorexia，因為，PKC mRNA的含量與NPY mRNA的含量同步減少。在進一步的實驗，將確認PKC的變化是發生在下視丘NPY neuron內。方法上，將用「PKC drugs前處理」方式，即在AMPH注射前，將PKC activator (TPA) 或inhibitor (chelerythrine)直接注入下視丘PVN部位，觀察對AMPH anorexia之影響。PVN是NPY神經傳遞路徑(NPYergic neurotransmission)的主要部位，內含NPY神經元。此外，將以雙重免疫顆粒染色法(double immunostaining)，觀察AMPH注射後，在NPY神經元內，是否同時減弱了NPY及PKC免疫顆粒。在「AMPH tolerance」組方面，將用「PKC antisense前處理」方式，每天在AMPH注射前，將specific PKC antisense (PKCα 或PKCδ antisense)注入下視丘PVN部位，觀察對AMPH tolerance之影響。PKC antisense是一種DNA oligonucleotide，在細胞內可阻斷PKC 基因的表現。