桑葉多酚抑制血管病變之作用及分子機轉研究

桑葉（Morus alba L. leaves）來自於一種天然植物桑科落葉喬木，具有豐富的
多酚成分，本實驗室已分離各桑葉成分（附件一）及抗LDL 氧化（附件二），及
抑制VSMC 增生及位移（附件三~五），因為眾多的多酚及酚酸，可能具有抑制心
血管病變的功能，因此本研究探討（1）桑葉及多酚之萃取物（MLE, MLPE）降
血脂及抑制低密度脂蛋白氧化及心血管病變等作用；進一步探討（2）抑制氧化型
低密度脂蛋白（ox-LDL）所誘導之泡沫細胞的形成；及（3）探討抑制血管平滑
肌細胞（VSMC）之增生與遷移作用；（4）是否具有保護血管內皮細胞，避免血
管內皮細胞死亡之作用。
第一年之計劃擬探討MLE 與MLPE 抑制血脂肪及對抗LDL 之氧化作用，分別
在cell free system 與animal model 當中以thiobarbituric acid reactive substances
（TBARS），electrophoretic mobility（EM）及apoB 斷裂試驗評估LDL 被氧化的
情形；並以紐西蘭白兔的動物模式，誘導產生動脈粥狀硬化病變來評估MLE 之降
血脂及降低血管病變的作用；由於ox-LDL 誘導巨噬細胞形成泡沫細胞，在早期
動脈粥狀硬化發展過程當中，扮演一個相當重要的指標，我們將進一步誘導
J774A.1 巨噬細胞形成泡沫細胞來評估MLE 與MLPE 之降血脂作用之機制，同
時，我們將以免疫染色觀察MLE 對兔子血管內皮細胞傷害之抑制作用。而第二年
的工作，我們擬探討MLE 與MLPE 抑制血管平滑肌細胞之不正常增生與遷移現
象，利用誘導A7r5 細胞株產生增生與遷移，再利用細胞計數、流式細胞儀、傷口
癒合、boyden chamber 分析MLE 與MLPE 之抑制作用，並搭配免疫沉澱、西方點
墨法、訊息傳遞抑制劑等，分析抑制增生及位移其中相關的機轉，並利用動物試
驗之檢體配合免疫染色（anti-PCNA, anti-α actin,）觀察VSMC 之不正常增生與遷
移現象，驗證我們在細胞實驗得到的結果；第三年的工作，我們擬探討MLE 與
MLPE 對於血管內皮細胞之保護作用，觀察MLE 與MLPE 是否具有抵抗HUVEC
細胞死亡，降低自由基、減少黏著蛋白及維持其正常功能之效用，並利用免疫沉
澱、西方點墨法分析抑制內皮細胞傷害相關的分子機轉，並利用動物試驗之檢體
配合免疫染色（anti-ICAM, anti-VCAM）觀察內皮細胞損傷之情形，驗證我們在
細胞實驗所得到的結果。
從以上的結果，我們預期MLE 與MLPE 具有（1）降血脂、抗LDL 氧化作用；
（2）抑制ox-LDL-induced atherosclerosis 是經由抑制泡沫細胞之生成；（3）抑制
VSMC 細胞增生是經由MLE 與MLPE 是造成cell cycle arrest 達到抑制細胞生長，
並有效地調控VSMC 之遷移作用；（4）MLE 與MLPE 具有抗氧化，降低自由基
之生成，保護血管內皮細胞之能力，以上的試驗也經由動物實驗之組織染色證明。
因此，從以上的研究，可說明MLE 與MLPE 能夠預防心血管疾病之作用，具有
發展為一種優良的保健食品之潛力。