探討山藥對停經大鼠的行為及心理神經免疫功能之影響---一併探討細胞層面之效果

山藥（dioscorea; yam）長久以來廣泛被應用在中醫藥材，特別是用來改善體質及治療婦科
症狀。山藥含有皂.元diosgenin 成分，其化學構造與類固醇相似，長久以來都被用來做為製造
類固醇賀爾蒙cortisone、雌性素（estrogen）及黃體素（progesterone）的原料。婦女因手術切除
卵巢或老化造成卵巢功能降低所出現的停經，都會導致體內雌性素及黃體素之濃度降低，但是「發
炎性細胞激素」（proinflammatory cytokines）的濃度會增加，而且經常伴隨出現焦慮、易怒、失
眠及憂鬱等精神症狀，稱為「停經症候群」（menopausal symptoms）。但是目前並不清楚上述停經
後之精神症狀是否與神經內分泌及免疫系統功能失調有關，也不清楚飲食補充山藥是否可以改善
停經動物的神經內分泌功能，進而增進心理健康。而且，目前並沒有合適的細胞模式可以用來探
討山藥或其他藥物對停經狀態下之細胞的影響。
本研究擬在三年期間內使用停經動物並且也在細胞層面探討山藥對「心理-神經-免疫」功能
（psychoneuroimmunological issue）之影響，逐年分別完成下列研究工作：（1）探討山藥餵食對
停經動物之焦慮程度、憂鬱行為及學習能力的影響；（2）探討山藥餵食對停經動物之內分泌與免
疫功能之影響；（3）探討雌性素受體在山藥療效所扮演的角色。
本實驗將使用卵巢切除之Wistar 大鼠模擬停經動物，在卵巢切除一個月後以高腳十字迷宮
（elevated plus-maze）測量其焦慮程度，而後每天經口餵食山藥（0、250、750 或1500 mg/kg）
連續4 週，然後再分別以高腳十字迷宮測量動物之焦慮行為，以往覆箱（shuttle box）進行「習
得無助」（learned helplessness）電擊處理，而後進行主動逃避試驗（active avoidance test）來探討
動物之憂鬱行為及學習功能。實驗結束後將採取動物之血液及腦組織（大腦皮質、前額葉皮質、
杏仁核、紋狀體及海馬回等區域），以放射免疫分析法（radioimmunoassay; RIA）測量血液中雌性
素、黃體素及cortisol 之含量，並以酵素接合免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay;
ELISA）測量血液及腦組織裡細胞激素例如interleukin-1（IL-1）、IL-2、IL-6 和tumor necrosis
factor-alpha（TNF-α）之含量，以釐清飲食補充山藥是否可以改善停經動物之內分泌-免疫及情緒
行為功能。
為了釐清在停經缺乏動情激素調控下，山藥在細胞層面之作用，並探討雌性素受體在山藥
療效之角色，本實驗將進一步以基因干擾技術，將ER-α siRNA 以oligofectamine protocol 轉殖入
神經細胞株NG108-15（neuroblastoma glioma cell）與乳房上皮細胞株（MCF-7 和Hs 578 T）中，
將雌性素受體蛋白（ER-α）的基因關閉，模擬停經後雌性素濃度降低的現象，以建立細胞層次
的停經模式。將各細胞株施予山藥（5、10、25、50 及100 μg/ml）處理（12、24 或36 小時），
而後測量細胞株釋放細胞激素之功能，並以流式細胞樣品分析法（flow cytometric analysis）測
量處於細胞週期中的G1/S 或G2/M 週期的細胞數比例，並偵測細胞激素及細胞凋亡調節蛋白
Fas/Fas ligand、Bcl-2 和caspase 3 的含量，以探討在停經缺乏雌性素（或缺乏雌性素受體）之情
況下，山藥對細胞激素、細胞週期和細胞凋亡的影響。