剪接因子hCDC5p與轉錄因子C/EBP Delta和Prox1p間的功能研究

真核細胞的剪接體(spliceosome)是經過一系列有次序性步驟的過程，組合而成的核醣核酸蛋白複合體(ribonucleoprotein particle)；而pre-mRNA剪接反應(splicing reaction)是發生在剪接體上，經過兩步驟催化反應的過程。Cef1p/Ntc85p是酵母菌Saccharomyces cerevisiae的一個必需剪接蛋白(splicing factor)，同時會形成一個至少含有8個蛋白質的Prp19p複合體。人類hCDC5p與酵母菌Schizosaccharomyces pombe CDC5p是酵母菌S. cerevisiae Cef1p/Ntc85p的功能相似體。所以像Cef1p/Ntc85p，hCDC5p與CDC5p也都是pre-mRNA剪接蛋白；另外CDC5p與hCDC5p也會形成巨大的蛋白複合體。因此經由酵母菌two-hybrid分析，我們利用hCDC5p當作探針，可以來尋找hCDC5p的結合蛋白。我們總共進行兩次人類liver cDNA基因庫的篩選，篩選了3 × 105個質體，目前我們篩選出12個菌落，其中並沒有基因跟pre-mRNA剪接反應有直接關聯，但是有3個基因是轉錄因子(transcription factor): Prox1p、C/EBPδ與HARS1。5個基因與蛋白運送有關，4個基因功能未知。酵母菌two-hybrid分析證實hCDC5p與3個轉錄因子: Prox1、C/EBPδ與HARS1確實可以特定性結合 這個研究計劃，希望經由抗體co-immunoprecipitation分析，來證實hCDC5p與3個轉錄因子: Prox1、C/EBPδ與HARS1確實可以特定性結合；如果可以特定性結合，hCDC5p與3個轉錄因子彼此的結合區域也需要被鑑定，同時證實leucine dimerization domain是否負責hCDC5p與C/EBPδ和HARS1彼此的結合。而hCDC5p與3個轉錄因子的heterodimer如何在HeLa 與HepG2細胞調節基因的表現與細胞的生長和分化也將被研究。另一方面，3個轉錄因子是否與pre-mRNA剪接反應有關也可以利用抗體抑制的分析來研究；如果有關，經由新的哺乳類pre-mRNA剪接蛋白的鑑定，可以讓我們對哺乳類pre-mRNA剪接反應有更完整的認識，而且經由hCDC5p與3個轉錄因子，也可以讓我們對基因的轉錄與pre-mRNA剪接彼此的關係有進一步的認識。