Project title
96學年度國家科學及技術委員會補助研究計畫
Acronym
專題研究計畫
Internal ID
NSC96-2314-B040-026
Principal Investigator
Status
research project
Start Date
August 1, 2007
End Date
July 31, 2008
Organizations
Partner Organizations
Project Web Site
Options
以台灣肺癌患者胸水中建立出之HPV 16感染之肺腺癌細胞株探討HPV16 E6在肺癌p16基因甲基化作用機轉
Description
最近研究指出，致癌病毒感染宿主細胞，會經由使宿主細胞抑癌基因甲基化，而導致細胞
的腫瘤化，但其作用機轉仍不清楚。本研究室亦發現人類乳突瘤病毒HPV 感染的肺癌患者
肺腫瘤組織中，p16 甲基化的發生頻率遠高於沒有HPV 感染之肺癌患者(Wu et al., 2005)，
且可能是經由甲基轉移.3b (DNMT3b)的過度表現所致(Lin et al., 2005)。已知高危險型
HPV 所轉錄產生的致癌蛋白E6 可經由降解p53 抑癌蛋白而促使細胞的腫瘤化，亦有研究
指出p53 抑癌蛋白可抑制DNMT 轉錄起始區的轉錄活性進而抑制DNMT 蛋白的表現，因
此推測HPV 可能藉由E6 蛋白使p53 蛋白去活化而無法抑制DNMT 的轉錄，進而促使抑癌
基因p16 的甲基化。但在子宮頸癌的研究發現，HPV 16/18 E7 會與HDAC 交互作用，而使
HDAC 維持DNA 雙股結構之能力失效，使E2F 啟動有關細胞增生之基因轉錄活化，本研
究室又發現DNMT1 及DNMT3b 在子宮頸癌組織中的表現量遠低於肺腫瘤組織，且p16 發
生甲基化的頻率也相對偏低。此結果與肺癌組織 (Wu et al., 2005)以及HPV 轉染之細胞所得
之結果，並不相同。這顯示HPV 16/18 E6 及E7 致癌蛋白在肺癌細胞及子宮頸癌細胞株的
甲基化調控機制以及致癌機轉有所不同。除p53 外，DNMT3b 轉錄起始區的基因多型性亦
影響其基因的轉錄調控，且HPV16 致癌蛋白E6 是否會直接調控DNMT3b 的表現則仍不清
楚，因此本計畫擬構築不同基因型之DNMT3b 轉錄起始區轉染至HPV 16 感染的肺腺癌細
胞TL-1 及TL-2 (此系列細胞株為本實驗室由台灣肺癌患者胸水中建立出之HPV 16 感染之
肺腺癌細胞株)，利用report assay 及Chromatin immunopreciption assay (CHIP)方式分析釐清
HPV E6 致癌蛋白是經由抑制p53 而活化DNMT3b，或是可直接經由與DNMT3b 轉錄起始
區結合而活化DNMT 的表現，並釐清HPV 對不同基因型之DNMT3b 的轉錄活性是否有影
響，此外亦利用MS-PCR 及同步定量反轉錄聚合.連鎖反應(real-time RT-PCR)分別偵測p16
基因的甲基化及其mRNA 表現，以證明HPV 確實經由影響DNMT3b 造成p16 基因甲基化
影響p16 抑癌基因表現而使細胞腫瘤化，此部分實驗亦將利用siRNA 技術將TL-1 及TL-2
細胞的HPV 16 E6 抑制後反向證明。本計劃之執行結果將有助於瞭解HPV16 致癌蛋白E6
對甲基化路徑調控的影響。
的腫瘤化，但其作用機轉仍不清楚。本研究室亦發現人類乳突瘤病毒HPV 感染的肺癌患者
肺腫瘤組織中，p16 甲基化的發生頻率遠高於沒有HPV 感染之肺癌患者(Wu et al., 2005)，
且可能是經由甲基轉移.3b (DNMT3b)的過度表現所致(Lin et al., 2005)。已知高危險型
HPV 所轉錄產生的致癌蛋白E6 可經由降解p53 抑癌蛋白而促使細胞的腫瘤化，亦有研究
指出p53 抑癌蛋白可抑制DNMT 轉錄起始區的轉錄活性進而抑制DNMT 蛋白的表現，因
此推測HPV 可能藉由E6 蛋白使p53 蛋白去活化而無法抑制DNMT 的轉錄，進而促使抑癌
基因p16 的甲基化。但在子宮頸癌的研究發現，HPV 16/18 E7 會與HDAC 交互作用，而使
HDAC 維持DNA 雙股結構之能力失效，使E2F 啟動有關細胞增生之基因轉錄活化，本研
究室又發現DNMT1 及DNMT3b 在子宮頸癌組織中的表現量遠低於肺腫瘤組織，且p16 發
生甲基化的頻率也相對偏低。此結果與肺癌組織 (Wu et al., 2005)以及HPV 轉染之細胞所得
之結果，並不相同。這顯示HPV 16/18 E6 及E7 致癌蛋白在肺癌細胞及子宮頸癌細胞株的
甲基化調控機制以及致癌機轉有所不同。除p53 外，DNMT3b 轉錄起始區的基因多型性亦
影響其基因的轉錄調控，且HPV16 致癌蛋白E6 是否會直接調控DNMT3b 的表現則仍不清
楚，因此本計畫擬構築不同基因型之DNMT3b 轉錄起始區轉染至HPV 16 感染的肺腺癌細
胞TL-1 及TL-2 (此系列細胞株為本實驗室由台灣肺癌患者胸水中建立出之HPV 16 感染之
肺腺癌細胞株)，利用report assay 及Chromatin immunopreciption assay (CHIP)方式分析釐清
HPV E6 致癌蛋白是經由抑制p53 而活化DNMT3b，或是可直接經由與DNMT3b 轉錄起始
區結合而活化DNMT 的表現，並釐清HPV 對不同基因型之DNMT3b 的轉錄活性是否有影
響，此外亦利用MS-PCR 及同步定量反轉錄聚合.連鎖反應(real-time RT-PCR)分別偵測p16
基因的甲基化及其mRNA 表現，以證明HPV 確實經由影響DNMT3b 造成p16 基因甲基化
影響p16 抑癌基因表現而使細胞腫瘤化，此部分實驗亦將利用siRNA 技術將TL-1 及TL-2
細胞的HPV 16 E6 抑制後反向證明。本計劃之執行結果將有助於瞭解HPV16 致癌蛋白E6
對甲基化路徑調控的影響。