PGE2影響PB誘發CYP2B1表現機制之探討

已知苯乙基巴比妥酸（phenobarbital, PB）可誘發肝臟細胞色素P-450 2B1（CYP2B1）酵素活性，此外胞內cAMP濃度上升時 會抑制PB誘發肝細胞CYP2B1基因表現，而cAMP是透過何種機制影響肝臟中PB誘發肝細胞CYP2B1的表現，至今仍是未知。文獻指出，前列腺素E2（PGE2）會促進細胞中adenylate cyclase活性，進而增加胞內cAMP合成，因此本實驗採用初代肝細胞培養模式，在培養液中添加不同濃度PGE2來觀察肝細胞CYP2B1表現是否有受到影響。一些研究顯示PGE2影響基因表現是透過它的4種EP receptor，其中EP2 receptor的活化會增加胞內cAMP濃度進而增加 protein kinase A (PKA)活性。根據上述線索，我們在實驗中添加對EP2 receptor具有專一性的agonist-- butaprost，來證實PGE2調控肝細胞CYP2B1表現是否與EP2 receptor有關。動物實驗證實，PB會誘發NF-κB與DNA binding site 的結合。因此，本實驗也進一步探討PB誘發肝細胞CYP2B1表現是否與NF-κB活化有關。 實驗方法：由雄性SD大鼠肝臟分離出肝細胞，以RPMI 1640進行培養。（1）於培養液中添加不同濃度PGE2、butaprost，觀察它們對PB誘發CYP2B1蛋白質表現的影響。（2）預處理PKA抑制劑H-89後，觀察PGE2、butaprost對PB誘發CYP2B1蛋白質表現的影響。（3）以RT-PCR證實EP2-receptor的存在。（4）處理PB、PGE2、butaprost後，觀察NF-κB在細胞核內的表現。 目前研究結果發現，培養液中添加PGE2、butaprost在一定濃度範圍內（0.01~1μM）會抑制PB誘發CYP2B1蛋白質表現，而預處理H-89則會逆轉PGE2、butaprost抑制PB誘發CYP2B1蛋白質表現，另外，PB會促進細胞核中NF-κB與DNA binding site的結合。基於以上結果，我們認為PGE2抑制PB誘發CYP2B1蛋白質表現是透過EP2 receptor，且與PKA活性有關，而且PB會促進NF-κB進入細胞核內與DNA結合。 關鍵詞：苯乙基巴比妥酸、細胞色素P-450 2B1、前列腺素E2、EP2 receptor、PKA、NF-κB