飲食中脂質種類與含量對於PPARαresponse基因和非PPARαresponse基因之影響

摘要 根據以往的研究結果發現，餵食大鼠高魚油與高玉米油飲食，結果發現高魚油飲食可顯著抑制肝前癌細胞形成，但機轉未知。由於Eicosapentaenoic acid（EPA）、Docosahexaenoic acid（DHA）具有活化peroxisome proliferator —activated receptor α (PPARα)的作用，故本實驗目的在探討飲食中油脂種類與含量對大鼠肝臟內PPARα response 基因及非PPARα response 基因蛋白質和mRNA的表現。出生24小時內雄性大白鼠腹腔注射diethylnitrosamine（DEN, 15mg/kg），離乳後於飲食添加phenobarbital（PB, 0.05%）個別餵食高玉米油（23.5%）、高玉米油及clofibrate（0.1%）或高魚油(20%魚油及3.5%玉米油) 6個月。以吸入過多二氧化碳方式犧牲大鼠，分離大鼠肝臟蛋白質及mRNA。結果發現，高魚油組肝臟中CYP 4A1（Cytochrome P450 4A1）、L-FABP（Liver — fatty acid binding protein）及ACO （Acyl-CoA oxidase）mRNA表現皆高於高玉米油組和高玉米油及clofibrate（0.1%）組，而之前的研究也顯示，高魚油組肝臟中CYP 4A1蛋白質表現高於高玉米油組和高玉米油及clofibrate （0.1%）組，由結果發現clofibrate（0.1%）劑量的給予雖會促進PB誘發肝前癌細胞的發生但效果並不顯著，這可能是由於clofibrate會誘發體內解毒及抗氧化酵素產生的結果，另一方面因為餵食實驗飲食長達六個月，因此肝臟對於實驗飲食所帶來的影響，可能已經產生了一些適應性的反應，因此本研究另一個實驗是以短時間餵食（2週或6週）並增加不同油脂含量及不同clofibrate量（0.5%）的實驗飲食組。出生4週雄性大白鼠腹腔注射DEN（15mg/kg） ，並於飲食添加PB( 0.05%) 個別餵食高玉米油（23.5%）、高玉米油及clofibrate（0.1%或0.5%）、低玉米油（5%）、低玉米油及clofibrate （0.1%或0.5%）或高魚油(20%魚油及3.5%玉米油) 2週或6週後。以吸入過多二氧化碳方式犧牲大鼠，分離大鼠肝臟蛋白質及mRNA。經由Western Blot結果中發現餵食高魚油組大鼠肝臟中CYP 4A1、CYP 2B1蛋白質的表現會高於高玉米油組，飲食中添加clofibrate的老鼠肝臟中蛋白質CYP 4A1、Cytochrome P450 2B1（CYP 2B1）的表現量也有增加的情形。在Northern Blot實驗中大鼠餵食高魚油組和高玉米油及clofibrate（0.1 %或0.5%）與餵食高玉米油組相較，肝臟中CYP 2B1 mRNA表現量增加。Quantitative Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction實驗中發現大鼠餵食高魚油組和高玉米油及clofibrate（0.5%）與餵食高玉米油組相較，會增加ACO mRNA的表現量,另外在高魚油組及高或低玉米油及clofibrate（0.1%或0.5%）組中也會增加CYP 4A1、L-FABP mRNA的表現量，雖有些未達統計上的顯著差異。為了釐清脂肪酸對調控PPARαresponse基因和非PPARαresponse基因的表現，在本研究另一實驗結果中亦發現，n-3脂肪酸（EPA和DHA）誘導大鼠肝臟初代肝細胞CYP 4A1蛋白質、ACO及L-FABP mRNA表現的效果高於n-6脂肪酸（Linoleic, LA），而n-3脂肪酸誘導非PPARαresponse基因Placental glutathione S-transferase （PGST）蛋白質表現效果低於n-6脂肪酸（LA）。綜合以上，本研究證實與玉米油相較，魚油可誘發PPARαresponse基因表現外亦可調控非PPARαresponse基因之解毒酵素PGST及2B1表現，而魚油抑制肝臟foci形成與魚油調控基因表現間之關係仍須進一步研究。 關鍵詞：PPAR , fish oil , clofibrate , liver , EPA , DHA。