2026-11-092026-11-09https://scholars.csmu.edu.tw/handle/123456789/38733Cyclosporin A (CsA) is used as an immunosuppressive agent and its prominent side effect is the induction of fibrous gingival overgrowth. The progression of fibrous gingival overgrowth results from the accumulation of extracellular matrix (ECM). Hypoxia-inducible factor-1α(HIF-1α) was found to be involved with some fibrotic diseases. However, the correlation between HIF-1α and CsA-induced gingival overgrowth was little known. Immunochemistry will be used to compare HIF-1αexpression between gingival tissues obtained from normal patients and CsA-treated patients in vivo. Reverse transcriptase-polymerase chain reaction、Western blotting and enzyme-linked immunosorbent assay will be used to determine the effects of CsA on the expression of HIF-1αin cultured human gingival fibroblasts in vitro. Furthermore, the blood will be corrected from CsA-induced gingival overgrowth patients and age-matched normal persons. Polymerase chain reaction-based restriction fragment length polymorphism assay will perform for evaluation of HIF-1αpolymorphism. In addition, various inflammatory mediators and kinsae inhibitors will add to evaluate the possible regulatory mechanisms of CsA-induced HIF-1α expression.環孢靈(cyclosporin A, 簡稱CsA)是臨床上被廣泛使用的免疫抑制劑，它的副作用很 多，大約百分之三十使用CsA 的病人會有牙齦增生的問題，並且容易因牙齦增生而出現 牙周炎現象。根據過去的研究，我們知道環孢靈誘發牙齦增生肇因於細胞外基質 (extracellular matrix,簡稱ECM)分解系統的低落，使得結締組織的ECM 產生增生的現 象；第一型低氧誘導因子a (簡稱：HIF-1a)也被證實和一些纖維化疾病有關。由文獻回 顧可知，鮮少有研究提及HIF-1a 與CsA 誘發牙齦增生(cyclosporin A-induced gingival overgrowth, 簡稱CsA-GO)的關係。本研究擬分3 年來探討HIF-1a在正常牙齦與CsA 誘 發牙齦增生組織間的差異性。第一年：本研究擬收集人類正常牙齦與CsA 誘發牙齦增生 組織病理切片，以免疫組織化學染色法，了解HIF-1a的表達情形。以組織培養法，培 養人類正常牙齦與CsA 誘發牙齦增生組織造纖維母細胞，抽取RNA、protein 及condition medium 比較HIF-1a分泌量；人類正常牙齦造纖維母細胞另加入CsA 以RT-PCR、Western blot、ELISA 等方法比較在是否會增加HIF-1a分泌量，本研究再多加入牙周致病菌、發 炎激素(proinflammatory cytokines)，模擬在發炎的情形下CsA 是否會促進牙齦造纖維母 細胞HIF-1a形成。第二年：針對CsA 誘發牙齦增生及正常人之間，探討其間HIF-1a的 差異性是否和HIF-1aDNA polymorphism 有關？抽取CsA 誘發牙齦增生病人及正常人 血液中genomic DNA，以PCR-RFLP 之方法來探討HIF-1apolymorphism 的關聯性，並 分析是否和性別、年齡、服用CsA 時間長短等因子具有相關性。第三年：以組織培養法， 培養人類正常牙齦造纖維母細胞，利用1 %氧氣培養及加入已知會造成細胞缺氧的 desferrioxamine (DFO)製造缺氧的模式，再分別加入CsA，利用Western blotting 及RT-PCR 的技術分析CsA對人類正常牙齦造纖維母細胞中HIF-1a的表現為何?進一步利用訊息傳 遞路徑的抑制劑探討CsA 對誘導人類正常牙齦造纖維母細胞中HIF-1a的相關訊息傳遞 路徑及其蛋白變化，如MAPK family、PI3K/Akt pathway。以EMSA 的分析方式探討CsA 是否影響HIF-1a的相關轉錄因子表現或與其target binding sequence 結合能力。環孢靈牙齦增生第一型低氧誘導因子a調控機制基因多形性Cyclosporingingival overgrowthhypoxia-inducible factor-1αregulatorymechanismgene polymorphismProject