2026-11-092026-11-09https://scholars.csmu.edu.tw/handle/123456789/37287葛蘭氏陰性菌之胞外蛋白分泌系統分為三種，TypeII是其中常見的一種，稱為一般分泌途徑(General Secretion Pathway,GSP)。該系統之蛋白分泌主要分成兩階段：第一階段是蛋白必須先通過內膜到達膜外漿(periplasm)，第二階段則是蛋白從膜外漿穿過外膜到達胞外。內膜分泌系統早自1980年代開始研究，分子機制已相當清楚。主要是以secABDEYGH等基因產物負責；至於外膜之分泌機制的研究則起步較晚，從1990年開始，詳細之分子機制知之甚少。中興大學遺傳工程中心主任胡念台教授等人，在1992年從十字花科黑腐病菌(Xanthomonascampestris) 中選殖到一12-kb DNA片段，從DNA序列知此片段含有11ORF(OpenReading Frame，分別命名為"xpsDEFGHIJKLMN")與其他葛蘭氏陰性菌外膜分泌系統之基因群有相當高之同源性，於是開始展開蛋白質分泌之研究。本計畫申請人自1994年加入胡教授研究行列，並於1996年共同在 J. Biol.Chem.發表一篇論文，本計畫申請人為第一作者，胡教授則為通訊作者。在今年的申請計劃中，我們將擴大過去的研究，擬提出三年的研究計畫來探討葛蘭氏陰性菌蛋白質外膜分泌系統。研究策略與過去研究XpsG、H、I、J、D的策略相同，但對象擴大到所有Xps基因群的蛋白，目標則在確定細胞膜上是否有multiple-proteincomplex的存在來執行蛋白質的分泌。另外我們也希望未來在試管中能重建這種複合體的構造，以便對整個蛋白質的分泌機制有突破性的發現。未來三年的研究方向分別敘述如下：第一年是表達所有Xps基因群的蛋白，然後純化這些蛋白並製作抗體。第二年是以gel-filtration與immunoaffinity等管柱層析法來瞭解複合體在invitro及invivo下是否存在。第三年則是以定位或刪除突變法來進行構造與功能相互關係之研究。上述實驗的成功將對 multiple-protein complex的存在與否，有決定性的證據。十字花科黑腐病黃單孢桿菌葛蘭氏陰性菌蛋白質傳送經膜傳送蛋白質分泌Xanthomonas campestrisG(-) bacteriaProtein translocationMembrane translocationProtein secretionProject