2026-11-092026-11-09https://scholars.csmu.edu.tw/handle/123456789/38515明膠水解.（gelatinases）是屬於基質金屬蛋白水解.（matrix metalloproteinases， MMPs）家族的成員，而且在細胞外基質的降解扮演著很重要的角色。在骨性關節 炎（osteoarthritis，OA）中，發現軟骨及滑膜會分泌這一些蛋白水解.。我們也發現 早期骨性關節炎中病變的軟骨、半月板和滑膜組織會有較高gelatinases（MMP-2 和 -9）和MT1-MMP 的表現；另外，在一些發炎性的關節液中，尤其是化膿性關節炎 及痛風性關節炎，會有較高的gelatinase，urokinase-type plasminogen activator（u-PA） 和PA inhibitor-1（PAI-1）的分泌；我們又發現葡萄醣胺（glucosamine），某些非類 固醇消炎止痛藥及關節內注射劑玻尿酸（sodium hyaluronate, ArtzR）和類固醇皆會抑 制早期骨性關節炎之軟骨、半月板和滑膜中MMP-2 的分泌及部份半月板和滑膜中 MMP-9 的分泌。同時，葡萄醣胺也會抑制早期骨性關節炎之滑膜中u-PA 和PAI-1 的分泌。這一些發現也許對早期骨性關節炎的治療上提供一些幫助。然而在早期骨 性關節炎中，不同分子量的玻尿酸對於早期骨性關節炎的軟骨、半月板和滑膜所分 泌的MMP-2、MMP-9、胞漿素原活化劑及抑制劑之確切調節關係卻很少有相關研 究。因此我們提出此研究計畫，擬探討臨床上被使用的不同分子量的玻尿酸（sodium hyaluronate，HyalganR；sodium hyaluronate，ArtzR；Hylan G-F 20，SynviscR）對於 人類早期骨性關節炎的MMP-2、MMP-9、胞漿素原活化劑及抑制劑的變化及他們之 訊息傳遞相關路徑研究，以提供臨床上治療的幫忙。本計畫擬分成兩年探討： 計畫第一年擬進行【1】將關節鏡手術取出的人類早期骨性關節炎的軟骨、半月 板和滑膜組織， 利用組織培養的方式， 加入不同分子量的玻尿酸（ sodium hyaluronate，HyalganR；sodium hyaluronate，ArtzR；Hylan G-F 20，SynviscR），觀察 並比較對於人類早期骨性關節炎軟骨、半月板和滑膜組織分泌MMP-2、MMP-9 的 差異性變化。【2】利用組織培養的方式，加入三種不同分子量的玻尿酸，利用ELISA 的分析方式觀察並比較對於人類早期骨性關節炎軟骨、半月板和滑膜組織分泌胞漿 素原活化劑及抑制劑的差異性變化【3】利用三條主要MAPK 路徑的抑制劑〔MAP kinase-ERK kinase/extracellular signal-regulated protein kinase（MEK/ERK）的抑制劑 U0126、p38 的抑制劑SB203580 和c-jun N-terminal kinase（JNK）的抑制劑SP600125 〕和PI3K 的抑制劑LY294002，研究不同分子量的玻尿酸，對於人類早期骨性關節 炎MMP-2、MMP-9、胞漿素原活化劑及抑制劑的製造和分泌之細胞訊息傳遞及路徑。 計畫第二年擬進行【1】將關節鏡手術取出的人類早期骨性關節炎的軟骨和滑膜 組織，利用primary culture 的技術，培養出osteoarthritic chondrocytes 和synovial fibroblasts，再加入三種不同分子量的玻尿酸，觀察並比較對於人類早期骨性關節炎 chondrocytes 和synovial fibroblasts 分泌MMP-2、MMP-9、胞漿素原活化劑及抑制劑 的差異性變化。【2】以RT-PCR 及real-time PCR 分析三種不同分子量的玻尿酸抑制 人類早期骨性關節炎chondrocytes 和synovial fibroblasts 的MMP-2、MMP-9、胞漿 素原活化劑及抑制劑的mRNA level 的變化。【3】以EMSA 和Western blotting 探討 三種不同分子量的玻尿酸對人類早期骨性關節炎chondrocytes 和synovial fibroblasts 是否透過抑制上述基因的相關轉錄因子表現或與其target binding sequence 結合能 力，如：MMP-2 的轉錄因子CREB、AP-2、 SP-1，MMP-9 的轉錄因子NF-κB、c-Jun、 c-Fos、SP-1、AP-1 及u-PA 的轉錄因子Ets-1、 NF-κB 等。【4】選植基質分解相關 蛋白.（MMP-2、-9、u-PA 及PAI-1）的promoter region，構築luciferase/reporter gene plasmid（pGL3），送入人類早期骨性關節炎chondrocytes 和synovial fibroblasts 中， 同時處理對目標基因有抑制效果的不同分子量的玻尿酸，以luciferase assay 分析不 同分子量的玻尿酸對個別基因promoter 的調控。Project