2026-11-092026-11-09https://scholars.csmu.edu.tw/handle/123456789/38174過去本研究室已發現肺組織benzo[a]pyrene 類似之DNA 鍵結物含量可做為罹患肺 癌之危險指標。同時又發現不抽煙之肺癌患者之此類DNA 鍵結物含量並不低於抽煙患 者，而此DNA 鍵結物之形成量與參與代謝活化與解毒之CYP1A1 與GSTM1 之基因多 形性無關。過去之研究又發現肺癌患者之DNA 修補能力遠低於健康者。這些結果都暗 示不抽煙肺癌患者之DNA 修補基因之調控可能發生改變，而造成DNA 修補能力降 低。本研究室初步以RT-PCR 方法篩檢五種DNA 修補基因之表現，結果僅發現XPC mRNA 之表現與淋巴結轉移有關，且可做為肺癌患者之預後指標。因此本三年計畫之 第一年計畫擬擴大肺癌樣本數，同樣以RT-PCR 方法瞭解不抽煙之肺癌患者是否確實 有較抽煙患者有較低之XPC 基因之表現？以及XPC mRNA 表現是否確實與淋巴結轉 移之臨床因子有關。已知p53 蛋白是調控XPC 基因轉錄之轉錄因子，因此須先釐清p53 基因發生突變與XPC 基因表現之相關性，以瞭解XPC mRNA 之表現是否主要經由p53 蛋白調控？由已知之XPC 啟動子得知XPC 之轉錄調控，還有其他重要轉錄因子參與， 尤其是SP1，因此本計畫第二年擬建構不同段之XPC 啟動子，以luciferase assay 分析 SP1 結合區之啟動子，在XPC 基因之轉錄調控上是否扮演較重要之角色？同時亦轉染 wildtype 或mutant 之p53 cDNA 到H1299 細胞，以瞭解XPC 基因之調控與p53 蛋白 之相關性以及確定何者才是重要調控XPC 基因之轉錄因子與啟動區？近年研究已知啟 動子甲基化(promoter hypermethylation)在肺癌癌化過程，參與抑制抑癌基因之表現。而 在有SP1 結合區之啟動子序列中有17 個CpG islands，本計畫第二年將大膽假設XPC 基因不表現，可能是經由啟動子過度甲基化，因此將以methylation specific-PCR (MSP) 與direct sequencing 方法分析肺腫瘤組織中XPC 基因該區域之啟動子，是否發生甲基 化，而造成XPC 基因之不表現？ 並分析甲基化與XPC mRNA 表現是否相關？以及 XPC 甲基化與臨床因子間之相關性。同時進行肺癌細胞株實驗，確定XPC 基因的表 現與其該區域啟動子甲基化之相關性，並以去甲基化藥物處理，以瞭解該區域甲基化 在XPC 基因轉錄調控之重要性。本計畫第三年將以RNA interference 技術建立XPC knock-down 之肺癌細胞株，並挑出具有不同程度XPC knock-down 之肺癌細胞株，進 行Boyden chamber assay 瞭解其腫瘤侵襲與轉移能力是否不同？同時以real-time PCR 分析已建立好之具有不同腫瘤侵襲與轉移能力之肺癌細胞株CL-1-0, CL-1-1 與CL-1-5 之XPC mRNA 表現量，是否與侵襲與轉移能力有關？同時將此RNAi 肺癌細胞株進行 動物腫瘤轉移實驗，以確定抑制XPC 基因表現是否會增強肺腫瘤侵襲與轉移能力？為 瞭解參與腫瘤瘤侵襲與轉移之可能路徑，本計畫將分析已知參與肺癌轉移之CRMP-1 與CTGF 基因表現，同時分析一些已知會參與肺腫瘤轉移之基因，例如MMP-2, PAI-1, cyclin B1 and cyclin E 等基因之表現，以初步瞭解XPC 基因參與肺腫瘤轉移之可能路 徑。本計畫之成果將有助於瞭解XPC 基因之轉錄調控機轉以及在肺腫瘤化過程中扮演 之角色，尤其是腫瘤侵襲與轉移之可能性。本計畫之成果將可應用於肺癌之預防、早 期診斷與臨床治療，尤其是罹患肺癌風險較低之不抽煙者。Project