2026-11-092026-11-09https://scholars.csmu.edu.tw/handle/123456789/37187葛蘭氏陰性菌之蛋白分泌是必須先通過內 膜,到達核外漿(Periplasm),然後才能通過外膜,送 至胞外.內膜之分泌系統是以SecA、B、D、E、Y等 基因產物負責,而核外漿與外膜之分泌系統則 知之甚少.胡等人最近從Xanthomonas campestris中選 殖到一DNA片段可使蛋白分泌量低之菌株恢復正 常,分析此段12kb DNA序列,發現此片段DNA含有ORF D 、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N、O(Xps)且與 Klebsiella oxytoca(Pul)、 Erwinial chrysanthemi(Out)、Pseudomonas aeruginosa(Xcp)、Aeromonas hydrophila(Exe)等 葛蘭氏陰性菌所含有之Gene cluster有相當高之同 質性.其中XpsD對於蛋白之分泌是必須的,但功能 未知.而XpsG、H、I、J則與Pilin有相當高之同質 性.XpsE則具有ATPase之活性,當ATP-binding site被破 壞後,整個蛋白之分泌量均降低.XpsO為Prepilin peptidase,負責Signal peptide之切斷.由上述可知,胡 等人所選殖到之DNA片段,其含有之基因應直接 參與了外膜之蛋白分泌.雖然上述各ORF之功能 已漸有所知,但對於各蛋白在整體上之關係目 前仍無文獻報導.故在本研究中,我們擬以XpsD之 抗體以及Cross link之反應來探討XpsD蛋白與其它 蛋白間相互結合之可能性.如果此種分析系統可以建立,則將配合胡等人所構築之XpsD secretion defect mutants,以了解XpsD與其它蛋白結合 之Binding domain.另外,從Cellfractionation之實驗,可 判斷此未知蛋白在細胞中所處之位置.從Cross link後蛋白之分子量大小,可推算此未知蛋白是 否屬於Xps中之任何一種,然後可用Deletion, in vivo cross link reaction,immunoaffinity chromatography之方法 來做進一步之確定.我們希望能從本研究之結 果中,對核外漿與外膜之分泌系統有更深入之 了解.葛蘭氏陰性菌胞外蛋白分泌Gram negative bacteriaExtracellular proteinSecretionProject