李宗貴Chong-Kuei Lii楊訟芬Sung-Fan Yang營養科學研究所2026-03-249999-12-311999https://handle.ncl.edu.tw/11296/vpj6pahttps://scholars.csmu.edu.tw/handle/123456789/6612摘 要 本研究目的在探討大白鼠肝細胞培養時常被添加於培養液中的胰島素(insulin)及甲基脫氫皮質醇(dexamethasone)兩種荷爾蒙對肝細胞內麩胱甘(GSH)、GSH相關酵素活性之影響，其中酵素部分包括有 g-glutamylcysteine synthetase (GCS)、GSH S-transferase (GST)、GSH peroxidase及GSH reductase四種，除酵素活性外，也分析四種GST isoforms及GSH synthetase的蛋白表現。 實驗方法：從雄性SD大鼠分離出肝細胞進行為期六天的體外培養，培養液中的含硫氨基酸濃度分為兩種，分別為1.0 mM methionine + 1.0 mM cysteine(高濃度)或0.1 mM methionine + 0.1 mM cysteine(低濃度)；各組培養液再依5 mg/L 胰島素(insulin)與1 mM 甲基脫氫皮質醇(dexamethasone)添加的有無分為4小組：第一組加insulin、第二組加dexamethasone、第三組同時加入insulin及 dexamethasone、第四組則不含任何荷爾蒙。 結果顯示：在高濃度含硫氨基酸培養下，各組胞內GSH濃度均在第三天(72 h)達到最高，隨後遞減；第三天時，insulin組GSH濃度約增加2倍的起始濃度(90.5 vs 29.4 nmol/mg protein)，然而未添加組僅增加1倍；至於dexamethasone組增加最少，僅增加了70 %，同時加入insulin及dexamethasone組GSH增加幅度則介於insulin組與未添加組之間。在酵素活性方面，GCS活性的變化則與GSH濃度變化相似，insulin組最高而dexamethasone組最低；GST活性在第六天時，dexamethasone組與加有insulin及dexamethasone兩組活性上升且兩組均顯著大於insulin組與未添加組；GSH peroxidase活性隨著培養時間而漸減，其中未添加荷爾蒙組減少速率最慢，而添加dexamethasone組減少最快；至於GSH reductase活性在第四天後，才見dexamethasone組與同時添加insulin及dexamethasone兩組增加速率較其他兩組快。 在低濃度含硫氨基酸培養下，各組細胞GSH含量在六天培養期間均未較起始濃度高，雖然GSH濃度不似高濃度含硫氨基酸培養條件，但GCS、GST、GSH peroxidase及GSH reductase活性變化則均與高濃度含硫氨基酸組相似。 GST isoforms中 Ya及Yc蛋白質均隨著培養時間而漸減，且四組相似，Yb2則在有dexamethasone存在時，在六天中表現大致維持相似水準，然而Yb2在insulin組(+I)與未添加組(-,-)的表現是在第四天後快速減少；至於 Yp蛋白質則在第三天才見表現，隨後並快速增加，但dexamethasone組(+D)與insulin及dexamethasone均添加組 (+I,+D)增加幅度較(+I)組與均不添加組(-,-)小，另外，Yp在低濃度含硫氨基酸下的表現也較高濃度含硫氨基酸下明顯。 綜合以上結果，methionine及cysteine濃度與胞內GSH含量高低有關，至於荷爾蒙作用上則是insulin促進GSH生合成，但dexamethasone則是抑制，Insulin及dexamethasone改變胞內GSH濃度與它們調控GCS活性有關。除活性外，含硫氨基酸濃度高低、insulin與dexamethasone處理也明顯影響GST Yp蛋白表現，與 GCS活性的變化相似，也是insulin增加Yp表現，但dexamethasone降低 Yp 表現。 關鍵字：胰島素, 甲基脫氫皮質醇, 麩胱甘, glutathione S-transferase isoforms, 甲硫氨酸, 半胱氨酸, 老鼠肝細胞。胰島素甲基脫氫皮質醇麩胱甘太甲硫胺酸半胱胺酸老鼠肝細胞insulindexamethasoneglutathionemethioninecysteinerat hepatocytethesis