2026-11-092026-11-09https://scholars.csmu.edu.tw/handle/123456789/38401癌細胞轉移（metastasis）是癌症導致死亡以及治療複雜度提昇的主要原因; 而 癌細胞轉移已知與多種細胞生理改變密切相關，如改變癌細胞與胞外基質 （extracellular matrix，ECM）間及基底膜（basement membrane）的貼附（adhesion） 能力，破壞細胞間交互作用（intercellular interaction）的力量等。癌細胞之所以能 轉移主要是透過癌細胞分泌蛋白分解酵素， 如： serine proteinase 、matrix metalloproteinases (MMPs)、cathepsins 以及 plasminogen activator（PA）分解胞外 基質，最後導致intercellular matrix 分離和基底膜的分解，進而使癌細胞migration 及invasion 提昇。而在這些水解酵素中，MMP-2、MMP-9 及urokinase-type PA（u-PA） 在癌細胞migration 及invasion 過程中扮演著最重要的角色。 水飛薊素（silymarin）是一種由菊科乳薊Silybum marianum（Carduus arianus， milk thistle）果實分離出來的類黃酮（flavonoids），在歐亞地區因其抗肝毒性 （antihepatotoxic properties）特點，被廣泛使用於健康食品或藥品（台灣列為處方 藥）。目前許多研究指出，silibinin 可有效治療多種肝臟疾病（包括肝炎及肝硬化）。 而於活體或活體外試驗也證實，高劑量silibinin 具有抑制癌細胞生長能力、促使癌 細胞凋死亡及防止正常細胞癌化等作用，而且呈dose-及time-dependent 的關係。 雖然silibinin 可抑制癌細胞生長能力，甚至高劑量時可促使癌細胞凋亡的作用已經 相當明確。但對於抑制腎臟癌細胞轉移的詳細機制，仍極少被研究。 本實驗室初步以20 μM 以下濃度的silibinin 處理腎臟癌細胞株786-0，發現此 劑量不具細胞毒性，但對癌細胞之invasion 及migration 能力則有顯著抑制。而且 此劑量也會抑制786-0 分泌MMP-2 的能力。因此本計畫第一年擬進行【1】利用 MTT、migration/invasion assay、adhesion assay 及zymography 分析方式，完成silibinin 對不同腎臟癌細胞株(Caki-1, Caki-2, 786-0)，其細胞存活、移動、侵襲、貼附和轉 移能力、基質分解相關蛋白.活性的影響之分析，包括如：MMPs、tissue inhibitor of metalloproteinases（TIMPs）、plasmin、u-PA、tissue-type PA、PA inhibitors（PAIs） 及u-PA receptor （u-PAR）等。【2】探討silibinin 抑制不同腎臟癌細胞株(Caki-1, Caki-2, 786-0)細胞移動、侵襲、貼附和轉移能力的可能機制，包括細胞貼附能力、細胞移 動能力和細胞侵襲能力的改變及調控細胞外基質分解酵素的表現活性。【3】進一步 探討silibinin 抑制不同腎臟癌細胞株(Caki-1, Caki-2, 786-0)其細胞移動、侵襲、貼 附和轉移能力之蛋白.分泌的相關訊息傳遞路徑的蛋白變化，如：與細胞移動和貼 附能力有關的訊息傳遞Rho family、FAK pathway，與影響侵襲能力的MMPs 活性 有關的訊息傳遞MAPK family ERK 1/2，p38 kinase 及c-Jun N-terminal kinases （JNK）1/2、phosphatidylinositol 3-kinase（PI3K）/Akt pathway。 計畫第二年擬進行【1】以RT-PCR 及real-time PCR 分析silibinin 抑制不同不同 腎臟癌細胞株(Caki-1, Caki-2, 786-0)其migration/invasion 和adhesion 相關基因的影 響，包括如：MMPs、TIMPs、plasmin、u-PA、t-PA、PAIs 及u-PAR 等。【2】以 electrophoretic mobility shift assay（EMSA）、Western blot 探討silibinin 是否抑制上 述基因的相關轉錄因子表現，或與其target binding sequence 的結合能力，如：MMP-2 的轉錄因子CREB、AP-2、SP-1，MMP-9 的轉錄因子NF-κB、c-Jun、c-Fos、SP-1、 AP-1 及u-PA 的轉錄因子Ets-1、NF-κB 等。【3】選植基質分解相關蛋白.（MMP-2、 MMP-9、u-PA、TIMP-1 及PAI-1）的promoter region，構築luciferase/reporter gene plasmid（pGL3），送入不同腎臟癌細胞株(Caki-1, Caki-2, 786-0)中，同時處理對目 標基因有抑制效果的silibinin，以luciferase assay 分析silibinin 對個別基因promoter 的調控。【4】探討silibinin 對增強抗癌藥5-FU (5-fluorouracil) 或doxorubicin 細胞 毒性其應用性及其可能機制。【5】選用silibinin，以動物模式，分析其對於接種不 同腎臟癌細胞株(Caki-1, Caki-2, 786-0) 的老鼠其腫瘤大小、重量及轉移至肺部的能 力，以評估應用的可行性。Project