2026-11-092026-11-09https://scholars.csmu.edu.tw/handle/123456789/38252報告指出人類微小病毒B19 (B19)感染相似於全身性紅斑性狼瘡(SLE)或類風濕關節 炎(RA)等，而B19 感染之臨床症狀特徵也有許多和自體免疫疾病相關，像傳染性紅斑、 關節痛、關節炎等症狀常常被報導。此外B19 感染病人也有自體抗體表現增加的情形。 過去我們實驗室的一些研究發現B19 感染會造成自體抗體的產生及與自體免疫疾病有 密切之關係。此外，也發現B19 感染之非結構蛋白(NS1)對於非紅血球系細胞(COS-7) 也會產生細胞凋亡的情形，但主要是經由粒線體路徑。並且NS1 會增加COS-7 細胞之 IL-6 之表現及分泌，進而促進自體抗體的產生。而至目前為止，人類微小病毒B19 在這 些自體免疫疾病發展的角色仍不清楚。而雖然B19 病毒感染人類組織有一限制,但是 B19 DNA 或抗原仍可在孩子或成人的心臟、肝臟、脾臟、腎臟、睪丸、皮膚、腦脊髓 液體和滑膜內被偵測到。人類微小病毒B19 是屬於小病毒(Parvoviridae)且無套膜之單股 DNA 病毒，基因約為5600 bases。主要由兩個殼體蛋白(結構蛋白)〔VP1 (781 amino acids [aa]) 和VP2 (554 aa)〕和非結構蛋白(NS1)所組成。已知NS1 會對紅血球系細胞產生細 胞毒性，並且和B19 病毒感染有關。而NS1 也被報導其功能為轉錄調節者，可藉由和 p6 DNA 序列促進者及Sp1/Sp3 轉錄調節因子直接地結合而參予調控。此外，NS1 也會 影響紅血球系細胞的DNA 複製、細胞週期和細胞凋亡,而引發一些臨床上相關的疾病。 所以推論NS1 在B19 感染引起的相關疾病上扮演著重要的角色。 因此，我們為了瞭解人類微小病毒B19 之非結構蛋白NS1 誘發的細胞凋亡或產生細胞 毒性或分泌細胞激素的影響和自體免疫疾病產生之間的關係，我們將進行三年的連續性 研究。第一年將先利用已構築至EGFP-C1 之B19 之非結構蛋白NS1 (wild type)和 NS1-K334E (mutant)之表達載體，分別轉染至COS-7, HEp-2, ECV 304, HeLa, HepG2, Jurkat T cell, HL-60, THP-1, U937, K562 , Raw 264.7 等細胞，進行Transient transfection 分析抗原的表現，並利用已知自體抗體如Sm, RNP, SSA, SSB, Centromere, Scl-70, Jo-1, ds-DNA,cardiolipin, CCP 等進行西方墨點法和Confocal 顯微鏡的分析與觀察。另外亦將 利用2-D 比較NS1 (wild type)和NS1-K334E (mutant)在轉染不同細胞及不同時間點時抗 原之表現，並進一步利用MALDI-TOF 分析及建立NS1 對不同細胞之蛋白質體的影響。 第二年將進一步利用NS1 (wild type)和NS1-K334E (mutant) 之表達載體，在分別轉染至 COS-7, HEp-2, ECV 304, HeLa, HepG2, Jurkat T cell, HL-60, THP-1, U937, K562 , Raw 264.7 等細胞後，利用activated Raw264.7 (Macrophage) 和Balb/c、NZB/W F1 mice, MRL/lpr/lpr mice 等正常及紅斑性狼瘡老鼠之腹腔Macrophages 進行吞噬凋亡細胞之研 究，分析並比較Transient transfection 或overexpression 的凋亡細胞被正常及紅斑性狼瘡 老鼠之腹腔Macrophage 在不同時期對於NS1 誘發細胞凋亡後的清除能力分析之比較。 並分析tTG(transglutaminase 2)在這時期之間的表現及影響。此外,亦將這些NS1-induced apoptosis 的細胞抗原免疫不同的老鼠，分析血清及各器官組織之抗原抗體表現。我們 在第三年將更進一步探討NS1 (wild type)和NS1-K334E (mutant) 誘發細胞凋亡後對免 疫細胞的影響，我們將利用NS1 (wild type)和NS1-K334E (mutant) 之表達載體，在分 別轉染至COS-7, ECV 304, HEp-2, ECV 304, HeLa, Hep-G2 等細胞後，co-culture 於Jurkat T cell, Raji B cell, THP-1，分析細胞之免疫影響。除此之外,我們同時也將利用純化之NS1 (wild type)和NS1-K334E (mutant)蛋白質或純化之NS1 or NS1K334E IgG antibody co-culture 於Jurkat T cell, Raji B cell, THP-1 分析細胞之免疫影響，以瞭解NS1 誘發細 胞凋亡後對於免疫反應之影響。希望藉由以上這些研究，能讓我們可以更進一步瞭解到 NS1 在B19 感染和自體免疫疾病的產生所扮演的角色及影響，甚至對未來治療或預防B19 感染和自體免疫疾病的產生有所貢獻。Project