2026-11-092026-11-09https://scholars.csmu.edu.tw/handle/123456789/38023乳癌是女性最常見的惡性腫瘤，幾乎占所有惡性腫瘤的1/3。而乳癌的形成和女 性荷爾蒙有密切的關係，尤其當乳癌細胞有荷爾蒙的接受體時，在女性荷爾蒙的刺 激下，會加速成長。另外亦有學者指出，乳癌之形成與某些特殊基因之突變，如P53, BRCA1/, FHIT, ARHI 基因，有極強之關聯性。但在乳癌的惡化過程中，有那些因素 參與在其中?至今原因仍是未明。 碳酸酐酵素 (carbonic anhydrase, CAs, E.C. 4.2.1.1) 是一種 zinc metalloenzyme, 於 1935 年首先由 Roughton 在紅血球中發現. 其正常生理角色為參 與呼吸 (respiration), 代謝中組織與肺臟之間 (metabolizing tissues) CO2/HCO3-運送, 維持組織與肺臟之 pH 值衡定 (pH homeostasis), 許多組織器官電解質的分泌 (electrolyte secretion), 及多種生合成反應例如 lipogenesis, gluconeogenesis, ureagenesis 等, 目前在哺乳類組織中有 14 種異構型 (isoforms) 已被發現及確認, CAI, CAII, CAIII 及 CAVII 屬 cytosolic, CAIV 屬 membrane-bound, CAV只存在粒 線體, CAVI 存在於唾液中屬分泌型, CA-RPVIII, CA-RP X 及 CARP XI 為 acatalytic enzymes, CAIX (又稱 MN protein), CAXII, CAXIV 屬 membrane-bound 而 且表現量與癌症密切相關。 碳酸酐酵素(CAs)活性與carcinogenesis 之間關係究竟如何? 目前研究尚未釐清, 但多數研究者推測 tumor-associated 的CA isozymes 可能具有促使cancers 周圍 microeviroment 酸化能力, 進而導致癌瘤細胞生長加速甚至轉移(metastasis). 目前以 immunohistochemistry 研究 CAII 顯示在malignant brain tumor, gastric 及 pancreatic carcinoma 是顯著升高; 以 western blot 及immunohistochemistry 分析CAI 及CAII 顯示在 colon cancer, NSCLC 及HCCs 則是顯著降低而且與 tumors progression 的程度呈反相關性, 至於在 breast cancer 直至目前則尚未有CAI, CAII 及 CAII 相關文獻提出。 本實驗室初步以 Western blot 及酵素活性分析人類乳癌檢體 tumor tissue 與 adjacent normal tissue 中 CAI, CAII 及 CAII, 發現 CAI 及 CAIII 在 tumor tissues 中都顯著降低, 而 CAII 則是顯著升高, 而且每一檢體組均呈一致性; 經臨床切片染 色 (immunohistochemitry) 及病理醫師判讀認為與 tumor progression 的程度呈密切 反相關性. 另外, 直至目前使用 inhibitors 或 activators 改變細胞之 CAs 活性, 並進一步 觀察 CAs 活性改變與細胞生長之關係, 則尚未有文獻提出; 另外, 使用重組DNA 技術 overexpression, siRNA 技術或knock down 技術改變 CAs 基因表現並進一步 觀察 CAs 活性改變與細胞生長之關係, 也尚未有文獻提出. 但是最近已有許多文獻 指出使用多種 CAs inhibitors 以抑制 MMPs 或 CAs 活性並進而達到抑制癌瘤細 胞 (antitumor)的作用。 因此本計畫擬於第一年進行 [1]首先對人類乳癌組織中 cytosolic CAs 蛋白表現(尤其是 CAI, CAII, CAIII) 在 tumor tissue 與 adjacent normal tissue 中表現如何? 能進一步分析及確認; [2]以 immunohistochemitry 分析人類乳癌組織之 tumors progression 的程度與 CAI, CAII, CAIII 蛋白表現相關性; [3]以RT-PCR或Northern blot 分析人類乳癌組織之 tumors progression 的程度與CAI, CAII, CAIII 之mRNA 表現相關程度。 [4]以gelatin-zymography, casein-zymography 及相關技術分析人類乳癌組織之ECM分 解酵素和ECM 分解酵素抑制劑之變化情形 擬於第二年進行 [1]以CAs inhibitors 或 activators 處理不同惡化程度的乳癌細胞株,如MCF-7, MDAMB-231 以改變細胞株中 CAs 活性, 並進一步觀察細胞生長, 吸附, 位移/ 侵入 (migration /invasion) 之變化情形 [2]以CAs inhibitors 或 activators 處理 breast cancer 細胞株, 以改變細胞株中 CAs 活性, 並進一步觀察細胞分泌ECM 分解酵素, 如MMP-2, -9, u-PA, t-PA 和ECM 分解酵素抑制劑, 如TIMP-1, -2, PAI-1, PAI-2 之變化情形 [3]從事CAs inhibitors 或 activators 改變細胞分泌ECM分解酵素和ECM分解酵素抑 制劑的機制分析, 如影響signal pathways 那些位點 [4]構築表現載體(overexpression vectors)以liposome 或siRNAs 系統以adenovirus 系 統transfection 至多種癌瘤細胞中以改變細胞株中 CAs 活性, 並進一步觀察癌瘤 細胞生長, 吸附, 位移/侵入 (migration /invasion) 之變化情形。Project