著絲點蛋白H連結的著絲點DNA之特性分析

著絲點蛋白A、C 和H 是位於著絲點Kinetochore 內層的結構性蛋白。著絲點蛋白A 和C
已知是和著絲點DNA 有連結的蛋白。形成著絲點部位的第一步是由著絲點蛋白A 連結上
著絲點DNA，然而形成有活性著絲點還必需要有著絲點蛋白C 聚集在著絲點上。著絲點蛋
白C 要聚集在著絲點則必須依賴已位於著絲點上的著絲點蛋白A 和H 的結合。除此之外，
新生的著絲點蛋白A 要聚集在著絲點也和著絲點上的著絲點蛋白H 有關。但是，著絲點蛋
白H 本身聚集在著絲點和存在於著絲點上的著絲點蛋白A 是互相獨立的。因此，著絲點蛋
白H 如何連結上著絲點是值得探討的課題。我們假設著絲點蛋白H 是藉由和某種著絲點
DNA 連結而聚集在著絲點上。為了研究著絲點蛋白H 連結的著絲點DNA，我們先前已利
用抗著絲點蛋白H 抗體所抓取的染色質絲(也就是染色質絲免疫沉澱法)建立了一個小型染
色質絲資料庫，叫做CHIP-H。在約有300 個來自CHIP-H 的菌株中，我們先任意挑96
個菌株進行細胞外蛋白質-DNA 鍵結分析，其中有五個菌株的DNA 出現較強的連結訊
號。因此，在本計畫中，第一年我們將針對這五個菌株DNA 進行一系列的特性分析，包括
DNA 定序、基因組特性分析和細胞內著絲點蛋白H 的連結能力分析，確立菌株DNA 是著
絲點蛋白H 連結之特定的著絲點DNA，此項結果將證明著絲點蛋白H 是藉由和特定的著
絲點DNA 連結而聚集在著絲點上。第二年我們將探討著絲點蛋白H 連結之特定的著絲點
DNA 和著絲點蛋白A 連結之特定的著絲點DNA 兩者的基因組關係。我們將利用此一著絲
點蛋白H 連結之特定的著絲點DNA 和已知的著絲點蛋白A 連結之特定的著絲點DNA 當
作探針篩選BAC DNAs，然後將有系統地定序候選的BAC DNAs，此一結果將更進一步
說明著絲點蛋白C 聚集在著絲點上是如何依賴已位於著絲點上的著絲點蛋白A 和H。最
後，我們更有興趣探討著絲點蛋白H 連結之特定的著絲點DNA 和著絲點蛋白A 連結之特
定的著絲點DNA兩者同時存在的BAC DNA在細胞內聚集著絲點蛋白以形成有活性的新生
著絲點的能力，因此我們將把候選的BAC DNAs 轉染到細胞內，然後分析著絲點蛋白聚集
在BAC DNA 上的情形。預期此一結果將闡明重新生成著絲點所需要的必要元素。